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細(xì)胞核的分離

更新時(shí)間:2014-05-21      點(diǎn)擊次數(shù):6326

   研究細(xì)胞核及其組成成分,如染色質(zhì)、DNA、核內(nèi)小RNA以及各種復(fù)制和轉(zhuǎn)錄酶等,需分離制備細(xì)胞核。
    真核細(xì)胞的細(xì)胞核為有膜細(xì)胞器,所分離的細(xì)胞核要保持核膜的完整性,核內(nèi)成分不外漏,核外細(xì)胞質(zhì)成分不內(nèi)滲或敖附在核膜上。通常用于分離細(xì)胞核的方法有3種,即有機(jī)溶劑法、蔗糖法和檸檬酸法。有機(jī)溶劑能阻止細(xì)胞質(zhì)的某些成分進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi),但不能保持細(xì)胞核的正常形態(tài),且可導(dǎo)致核內(nèi)一些酶的失活,常用于定量分析細(xì)胞核的生化成分及其他一些特殊目的。蔗糖高速離心法較簡(jiǎn)單,適用面廣,核純度高,保持生物活性,但要用高速離心機(jī)和較大量的蔗糖。檸檬酸法屬差速離心法,只需低速離心機(jī),細(xì)胞質(zhì)成分污染程度低,核破碎率也較低,蔗糖用雖較小,應(yīng)用廣泛。
    一、蔗糖高速離心法
    將組織勻漿中細(xì)胞核游離出來(lái),再經(jīng)過(guò)蔗糖密度梯度離心,將細(xì)胞核沉淀下來(lái)。蔗糖為低滲透壓介質(zhì),能防止細(xì)胞核自溶。在梯度液中含有Ca2+,能減少細(xì)胞核的脆性。
    二、檸檬酸低速離心法
    取組織在一定濃度的檸檬酸溶液中勻漿,通過(guò)差速離心將沉降系數(shù)較大的細(xì)胞核先沉淀下來(lái)。檸檬酸能除去紉胞質(zhì)里的酸溶性蛋白,整合二價(jià)陽(yáng)離子,抑制酶,減少校的破碎。

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